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SK-OV-3卵巢癌上海

作者:habao 来源:未知 日期:2013-9-6 12:55:39 人气: 标签:卵巢癌
导读:SK-OV-3(卵巢癌)基本特性:(1)原代细胞培养末期液氮冻存。(2)每冻存管细胞数:5×105cells/1ml。(3)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。…

  SK-OV-3(卵巢癌)基本特性:

  (1)原代细胞培养末期液氮冻存。

  (2)每冻存管细胞数:5×105 cells/1ml。

  (3)不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

  (4)代数:2-4代。

  (5)用途:只可用于科研。

  对于贴壁生长的SK-OV-3(卵巢癌)细胞,相对来说比较简单但很麻烦。以下主要讨论贴壁生长的细胞。

  在讨论之前,大家首先要有一个概念,即洁净区,并不是没有细菌,而是细菌的数量非常少,国家标准100级的洁净标准是浮游菌数不得超过5个每立方米,沉降菌数不得超过1个每培养皿。而国外的标准比我国的还要高一点,要求的数量更少。所以在我们的洁净操作台里,并不是真正一个细菌都没有的,所以在操作的时候还是要尽量利索迅速地完成操作。尽量减少进入培养体系细菌的数量。

  所以处理细菌污染的重要原则就是:无限地稀释细菌的浓度,无限地减少细菌的数量!

  1)将污染的培养液倒掉,转烧瓶口,加入10mlPBS,适当晃动清洗培养瓶,然后倒掉。转烧瓶口。

  2)继续加入10mlPBS,同样方法晃动,清洗培养瓶,然后倒掉。

  3)继续加入5mlPBS,同样方法洗瓶,主要是培养面,然后倒掉。

  4)重复步骤3再洗。

  5)重复步骤3再洗。

  6)加入3-5ml双抗,洗瓶,静置3-5分钟,然后吸出。

  7)加入3ml双抗,洗瓶,静置3-5分钟,然后吸出。

  8)再加入5mlPBS洗瓶,然后吸出。

  9)加入10ml培养液,加入2ml双抗,放置培养箱培养,5小时之后,倒掉培养基,加入PBS洗瓶两次,然后加入胰酶消化,吹打后置于离心机800-1000r/min离心,然后洗一次。置于新的培养瓶里培养,培养体系加入2ml双抗。

  磷酸化荷尔蒙脂肪酶

  HRAS样因子3

  羟基类固醇脱氢酶111

  羟基类固醇脱氢酶112

  羟类固醇脱氢酶17

  羟类固醇脱氢酶172

  羟类固醇脱氢酶173

  羟基类固醇脱氢酶3

  层细胞抗原

  层细胞抗原37

  热休克蛋白-20

  热休克蛋白-22

  热休克蛋白-27

  磷酸化热休克蛋白27

  磷酸化热休克蛋白27

  磷酸化热休克蛋白27

  磷酸化热休克蛋白27

  三羟基三甲基辅酶A裂解酶

  三羟基三甲基辅酶A还原酶

  磷酸化三羟基三甲基辅酶A还原酶

  三羟基三甲基辅酶A合成酶1

  三羟基三甲基辅酶A合成酶2

  肝细胞核因子1

  肝细胞核因子4

  磷酸化肝细胞核因子4

  10)24h之后,视情况换液,若仍然污染严重,培养基浑浊,重复以上步骤,若看不到污染物,则继续步骤1)、3)、4)、6)、8),然后加入培养液培养,培养体系加入2ml双抗。

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  ?紧密连接蛋白1IgG 人骨桥素(OPN) 绿脓杆菌

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  ?磷酸化接头蛋白CrkLIgG 人25羟基维生素D3(25(OH)D3/25 HVD3) 微生物

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