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VEGFR2阻断剂多肽及其应用

作者:文 来源:未知 日期:2019-12-11 11:27:44 人气: 标签:卵巢癌分类
导读:该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部属于苏州普罗达生物科技有限公司,未经苏州普罗达生物科技有限公司许可,擅…

  该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部属于苏州普罗达生物科技有限公司,未经苏州普罗达生物科技有限公司许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服】

  本发明涉及药物领域,具体涉及用于阻断VEGFR2的结合,治疗卵巢癌的VEGFR2阻断剂多肽。

  卵巢恶性肿瘤是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一,发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌而列居第三位。但卵巢上皮癌死亡率却占各类妇科肿瘤的首位,对妇女生命造成严重。由于卵巢的胚胎发育、组织解剖及内分泌功能较复杂,早期症状不典型,术前鉴别卵巢肿瘤的组织类型及良恶性相当困难。卵巢恶性肿瘤中以上皮癌最多见,其次是恶性生殖细胞肿瘤。卵巢上皮癌患者手术中发现肿瘤局限于卵巢的仅占30%,大多数已扩散到子宫,双侧附件,大网膜及盆腔各器官。目前治疗方法有:.手术治疗、化学治疗、放射治疗等。由于卵巢恶性肿瘤尤其是上皮癌很早扩散,手术时多数病例已不能清除病灶,而且放疗的效果及应用也很有限,因此性化疗是一项重要的辅助治疗方法。尤其是恶性生殖细胞肿瘤,规范化疗可明显提高患者率。一些晚期病人,经化疗后肿块可以缩小,为手术时满意减瘤创造有利条件。但抗肿瘤药物存在使得患者免疫低下,掉发、、体重下降等副作用,其应用。如何寻找高效,副作用低的抗卵巢癌药物成为亟待解决的难题。

  肿瘤的生长离不开血管的新生及各种生长因子的刺激与,肿瘤新生血管可能成为治疗肿瘤的一种有效方法。血管内皮生长因子(Vascularendothelialgrowthctor,VEGF)的高表达与实体肿瘤的形成及其转移密切相关,VEGF通过与血管内皮细胞膜上的性受体(Vascularendothelialgrowthctorreceptor,VEGFR)结合来激活信号传导的胞中有高表达,而在健康的身体内表达水平很低甚至不表达。VEGFR2可促进血管内皮细胞增殖、迁移及增加毛细血管通透性。肿瘤血管内皮细胞的有丝与肿瘤微血管的渗透性主要是通过VEGF与VEGFR2的相互作用而发生的。因此,VEGFR2阻断剂,可以有效VEGF与VEGFR2结合,进而有效肿瘤增殖,迁移,达到肿瘤生长的目的。

  一种药物组合物,其特征在于其包含如要求1所述多肽与一种以上药学上可接受的赋形剂、填充剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、或稳定剂。

  本发明中的VEGFR2阻断剂多肽1序列RVKHHINFPPSTMPPMYIGC,可以阻断VEGF结合VEGFR2,进而影响VEGF下游信号传导,实现抗肿瘤目的。本发明采用卵巢癌体内外模型验证了其可以有效肿瘤增殖,生长,可以作为有效的抗肿瘤候选药物,为开发新一代抗肿瘤药物提供新的选择。

  本发明涉及多肽(RVKHHINFPPSTMPPMYIGC)由吉尔生化(上海)合成。人卵巢癌SK-OV-3购自中国科学院上海细胞生物研究所细胞库。

  1、细胞培养:人卵巢癌细胞系SK-OV-3用含10%胎牛血清的McCoy’s5A培养基,在37℃、5%CO2、饱和湿度条件下培养,为上皮细胞型,贴壁生长。每2~3天用0.25%胰酶和0.02%EDTA常规消化、1:3~1:6传代培养。

  2、将对数生长的SK-OV-3细胞,以1.0×105加入96孔培养板中,培养24h,实验孔、阳性药物对照孔分别加入不同浓度的实验药物VEGFR2阻断剂多肽和阳性对照药物新碱;空白组加入相同体积的溶剂。每孔设五个复孔,培养48h,每孔加入MTT,作用4h后,加入DMSO,孵育30min,在酶标仪620nm处测定吸光度A值,按公式肿瘤细胞生长率=(1-实验组吸光值/对照组吸光值)×100%。计算出实验药物的IC50为0.43μM。而阳性对照药物新碱0.39μM,两者没有显著性差异,说明本发明多肽具有人卵巢癌作用。

  取对数生长期的人卵巢癌细胞SK-OV-3细胞株,在无菌条件下制备成5×107/ml细胞悬液,以0.1ml接种于裸鼠右侧腋窝皮下。用游标卡尺测量裸鼠移植瘤直径,待肿瘤生长至70-100mm3后将动物随机分组。使用测量瘤径的方法,动态观察被试多肽的抗肿瘤效果。肿瘤直径的测量次数为每2天测1次。给药方式均采用尾静脉注射。阴性对照组注射等量生理盐水,每天1次;紫杉醇组10mg/kg,每周给药1次;恩度组2.5mg/kg,每天给药1次;多肽高中低组分别以20mg/kg、10mg/kg、5mg前世身份测试/kg,每天给药1次。给药21d。试验结束后,小鼠处死,手术剥取瘤块称重。

  多肽对人卵巢癌细胞SK-OV-3裸鼠移植瘤生长试验结果表明,与阴性对照组相比,多肽20mg/kg、10mg/kg和5mg/kg组对人卵巢癌细胞SK-OV-3移植瘤的生长均具有极显著性的作用。5mg/kg组与阳性对照组紫杉醇相比,多肽对实验动物的体重没有明显影响,未见明显的毒副反应,存活率提高。

  

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